在化學(xué)中，分光光度法是定量測(cè)量材料的反射或透射特性作為波長(zhǎng)的函數(shù)。它比通用術(shù)語電磁光譜更具體，因?yàn)榉止夤舛确ㄌ幚砜梢姽?、近紫外和近紅外，但不包括時(shí)間分辨光譜技術(shù)。

　　分光光度法使用光度計(jì)，稱為分光光度計(jì)，它可以測(cè)量光束的強(qiáng)度作為其顏色(波長(zhǎng))的函數(shù)。分光光度計(jì)的重要特征是光譜帶寬(它可以通過測(cè)試樣品透射的顏色范圍)、樣品透射百分比、樣品吸收的對(duì)數(shù)范圍，有時(shí)還有反射率測(cè)量的百分比。

　　分光光度計(jì)通常用于測(cè)量溶液、透明或不透明固體(如拋光玻璃)或氣體的透射率或反射率。盡管許多生化物質(zhì)是有色的，例如它們吸收可見光，因此可以通過比色程序進(jìn)行測(cè)量，但即使是無色的生化物質(zhì)通常也可以轉(zhuǎn)化為適合顯色成色反應(yīng)的有色化合物，從而產(chǎn)生適合比色分析的化合物。然而，它們也可以設(shè)計(jì)為使用不同的控制和校準(zhǔn)來測(cè)量通常覆蓋約200nm至2500nm 的任何列出的光范圍的擴(kuò)散率。在這些光范圍內(nèi)，需要使用根據(jù)光度測(cè)定波長(zhǎng)而不同類型的標(biāo)準(zhǔn)在機(jī)器上進(jìn)行校準(zhǔn)。

　　使用分光光度法的實(shí)驗(yàn)的一個(gè)例子是確定溶液的平衡常數(shù)。溶液中的某種化學(xué)反應(yīng)可以正向和反向發(fā)生，其中反應(yīng)物形成產(chǎn)物，產(chǎn)物分解成反應(yīng)物。在某個(gè)時(shí)刻，這種化學(xué)反應(yīng)會(huì)達(dá)到一個(gè)平衡點(diǎn)，稱為平衡點(diǎn)。為了確定此時(shí)反應(yīng)物和產(chǎn)物的各自濃度，可以使用分光光度法測(cè)試溶液的透光率。通過溶液的光量表示不允許光通過的某些化學(xué)物質(zhì)的濃度。

　　光的吸收是由于光與分子的電子和振動(dòng)模式的相互作用。每種類型的分子都有一組與其化學(xué)鍵和原子核的組成相關(guān)的單獨(dú)的能級(jí)，因此會(huì)吸收特定波長(zhǎng)或能量的光，從而產(chǎn)生獨(dú)特的光譜特性。這是基于其特定和獨(dú)特的構(gòu)成。

　　分光光度計(jì)的使用跨越多個(gè)科學(xué)領(lǐng)域，如物理學(xué)、材料科學(xué)、化學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)。它們廣泛用于許多行業(yè)，包括半導(dǎo)體、激光和光學(xué)制造、印刷和法醫(yī)檢驗(yàn)，以及用于研究化學(xué)物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室。分光光度法通常用于測(cè)量酶活性、確定蛋白質(zhì)濃度、確定酶動(dòng)力學(xué)常數(shù)和測(cè)量配體結(jié)合反應(yīng)。最終，分光光度計(jì)能夠根據(jù)控制或校準(zhǔn)來確定目標(biāo)中存在哪些物質(zhì)，以及通過計(jì)算觀察到的波長(zhǎng)來準(zhǔn)確確定物質(zhì)的含量。